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    48T兔(Rabbit)雌二醇(E2)ELISA試劑盒

    發(fā)布時間: 2012/7/12  點擊次數: 981次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    兔(Rabbit)雌二醇(E2)ELISA試劑盒

    用 途:
        兔Estradiol ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細胞上清液及各種體液中的Estradiol 。本試劑盒可以檢測天然和重組的Estradiol 。本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。
        
     

    兔(Rabbit)雌二醇(E2)ELISA試劑盒

    試驗原理:
        兔Estradiol 試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Estradiol 濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Estradiol 和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Estradiol 的濃度呈比例關系。
     

    兔(Rabbit)雌二醇(E2)ELISA試劑盒

       
    試劑盒內容及其配制
    試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
    96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
    塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
    標準品:400pmol/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
    空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
    標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
    生物素標記的抗Estradiol抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
    親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
    洗滌緩沖液 1瓶(60ml) 1瓶(30ml) 按說明書進行稀釋
    底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
    底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
    終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型

    自備材料
    蒸餾水。
    加樣器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
    振蕩器及磁力攪拌器等。


    安全性
    避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
    實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
    不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。


    操作注意事項
    試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
    實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
    不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
    使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
    使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
    底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
    加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
    按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

    樣品收集、處理及保存方法
    血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
    血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
    細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
    保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    試劑的準備
    標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
    400 pmol/L (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
    200 pmol/L (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
    100 pmol/L (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
    50 pmol/L (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
    25 pmol/L (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
    12.5 pmol/L (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
    0 pmol/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

    洗滌緩沖液(20×)的稀釋:蒸餾水20倍稀釋。

    操作步驟
    使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
    根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
    加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
    甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
    每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
    每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
    取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
    在450nm波長處測定各孔的OD值。

    建議使用的實驗方案
     標準品濃度(pmol/L) 
    A 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
    B 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
    C 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
    D 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
    E 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
    F 12.5 12.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
    G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
    H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

    結果分析
    以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Estradiol 標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Estradiol 含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

    局限
    6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

    試劑盒性能
    靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
    特異性:不與人其它細胞因子反應。
    重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

    CB0292-250mg Chlorogenic acid 綠原酸 [327-97-9] 250mg
    C4031-500g Chlorobenzene 氯化苯 [108-90-7] 500g
    C2576-100g 2-Chlorobenzoic acid 2-氯苯甲酸 [118-91-2] 100g
    C6833-25g 3-Chlorobenzoic acid 3-氯苯甲酸 [535-80-8] 25g
    C2577-100g 4-Chlorobenzoic acid 4-氯苯甲酸 [74-11-3] 100g
    C6568-500ml 1-Chlorobutane (Butyl chloride) 1-氯丁烷 [109-69-3] 500ml
    CB0736-100g Chlorocholine chloride 氯化-2-氯乙基*銨 [999-81-5] 100g
    C6178-250g 4-Chlorocinnamic acid 4-氯肉桂酸 [1615-02-7] 250g
    C6664-10g 2-Chloroethanesulfonic acid sodium salt 2-氯乙基磺酸鈉 [15484-44-3] 10g
    C6174-250g Cinnamyl alcohol 肉桂醇 [104-54-1] 250g
    CB0311-10g Citrazinic acid 檸嗪酸 [99-11-6] 10g
     

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